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關(guān)于CCK8實驗步驟的敘述

更新時間:2025-08-28點擊次數(shù):68

CCK-8為細(xì)胞增殖檢測試劑盒,細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。必須強(qiáng)調(diào)指出,通過細(xì)胞分裂,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個子細(xì)胞中去??梢姡?xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。CCK8實驗步驟如下。

CCK-8實驗步驟

1、在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(37℃,5% CO2)。 

2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。

4、向每孔加入10μl CCK8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。

 CCK-8實驗步驟原理:

1、Cell Counting Kit簡稱CCK試劑盒,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

2、WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品,工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。 

3、CCK法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。 

細(xì)胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。 Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。


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