產(chǎn)品名稱:：  谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名: Glutamic Acid Dehydrogenase（GDH）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1460             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：650
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:  谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒|GDH檢測(cè)試劑盒|谷氨酸脫氫酶|試劑盒

簡要介紹：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機(jī)氮化合物的代謝中起重要作用。
GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸光度下降。通過測(cè)定340nm吸光度的下降速率，計(jì)算GDH活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
產(chǎn)品說明：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機(jī)氮化合物的代謝中起重要作用。
GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸光度下降。通過測(cè)定340nm吸光度的下降速率，計(jì)算GDH活性。
需自備的儀器和用品:
     紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。
2、稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟：

1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測(cè)定

（1）工作液的配制：臨用前將試劑一加入試劑二中混合溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；
（2）取1mL工作液和0.05mL樣本于光徑為1cm的1mL石英比色皿中，混勻，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1和5分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。注：當(dāng)ΔA大于0.5時(shí)，將樣本進(jìn)行稀釋后測(cè)量。
三、GDH活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GDH（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T=675×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GDH（U/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=675×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GDH（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.35×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.05×10^-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
 

谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測(cè)試劑盒