線(xiàn)粒體檸檬酸(MCA)含量檢測(cè)試劑盒

 紫外分光光度法 
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：BC2170 
規(guī)格：25T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容： 
酸性提取液：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存。 
堿性提取液：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存。 
試劑一：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。 
試劑二：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。 
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保 存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，10µmol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明： CA 是線(xiàn)粒體三羧酸循環(huán)的第1個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成，其 含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 CA 在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進(jìn)一步與苯 肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰，該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可 反應(yīng)出 CA 的含量。

自備儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。

操作步驟： 
一、線(xiàn)粒體中檸檬酸提取： 
1. 稱(chēng)約 0.05-0.1g 組織（建議稱(chēng) 0.1g 樣本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃ 離心 5min，取上清另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清（取 300µL 該上清液和 300µL 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定）；
沉淀即線(xiàn)粒體，向沉淀中加入 0.5mL 酸 性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），取此 溶液 300µL 和 300µL 堿性提取液中和，混勻，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
 

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